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要入門液相色譜儀，先吃透這些基礎內容，不管是理解原理還是后續(xù)操作，都能少走很多彎路。

一、核心定義：什么是液相色譜儀？

液相色譜儀，簡單說就是靠 “液相分離 + 分析” 技術工作的儀器。它直觀的特點是用液體當 “流動相”，而起到固定作用的 “固定相” 形式很靈活 —— 像我們常見的濾紙、薄層板，或是填充床，都能派上用場。其實在色譜技術慢慢發(fā)展的這些年里，為了把不同方法區(qū)分開，大家習慣根據固定相的形式給它們起名，比如用濾紙的叫紙色譜，用薄層板的叫薄層色譜，用填充床柱子的就是柱液相色譜。日常實驗中，柱液相色譜因為分離效率高、適用范圍廣，是常接觸的類型，我們平時說的 “液相色譜分析”，大多也指這類。

相關產品推薦：1、高效液相色譜儀  2、超高效液相色譜儀  3、制備液相色譜儀  4、專用液相色譜儀

二、系統(tǒng)組成：核心部件及作用

一套完整的液相色譜系統(tǒng)，通常會包含儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄儀這幾個核心部分。這幾個部件各司其職，少了任何一個都沒法正常工作：儲液器是流動相的 “存放站”，得保證流動相干凈無雜質；高壓泵是系統(tǒng)的 “動力心臟”，能穩(wěn)定輸出壓力，讓流動相勻速流過整個管路；進樣器相當于 “樣品入口”，能精準把少量樣品注入流動相；色譜柱是 “分離核心”，所有樣品組分的分離都在這里完成；檢測器是 “信號捕捉器”，能實時識別流出來的組分；記錄儀則是 “結果呈現器”，把檢測器的信號變成能看懂的圖譜。

實際工作時，儲液器里的流動相，會靠高壓泵穩(wěn)穩(wěn)地輸送到整個系統(tǒng)中；我們要分析的樣品溶液，通過進樣器注入流動相后，就會跟著流動相一起進入色譜柱 —— 也就是固定相所在的地方。這里有個關鍵的分離原理：樣品里的每一種組分，在流動相和固定相里的 “分配系數” 都不一樣。所謂 “分配系數”，可以理解成組分在兩相之間的 “喜好程度”—— 有的組分更 “喜歡” 固定相，就會多在固定相里停留；有的更 “喜歡” 流動相，就會跟著流動相快速前進。

表1.液相色譜常見類型及適用場景

表2.液相色譜系統(tǒng)核心部件及作用

三、工作原理：從進樣到出結果的全過程

所以當它們順著柱子移動時，會不斷在兩相之間反復 “吸附” 又 “解吸”，這個過程重復很多次后，不同組分的移動速度就會拉開明顯差距，后就能一個個分開，順著柱子依次流出來。等這些分開的組分經過檢測器時，樣品濃度會被轉換成電信號，傳遞到記錄儀上，終以清晰的圖譜形式呈現出來。簡單總結下就是：樣品溶在流動相里進入色譜柱，經過固定相（也就是柱子里的填料）時，因為被吸附的程度不同，所以各種組分流出柱子的先后順序也就不一樣了。我們后續(xù)分析圖譜時，就是通過 “流出順序”（出峰時間）和 “峰的大小”（峰面積），來判斷樣品里有哪些組分、每種組分含量多少。

液相色譜儀工作全流程圖

四、常見分離模式：反相色譜

在大家常用的反相色譜里，固定相的極性是比流動相小的 —— 比如固定相常用硅膠烷烴填料，流動相則多是乙腈、甲醇這類溶液。這是反相色譜核心的特點，也是它能分離大多數樣品的關鍵。這種情況下，樣品里的組分就會 “按極性排隊” 流出：極性小的組分，和固定相（極性也?。┑奈搅鼜?，就像 “好朋友互相吸引”，會在柱子里多待一會兒，所以要更晚才能從色譜柱里流出來，反映在譜圖上，就是出峰時間比較靠后；而極性大的組分，和固定相吸附力弱，更愿意跟著極性大的流動相走，所以會早早流出色譜柱，出峰時間靠前。比如分析中藥里的成分時，很多極性小的有效成分，就會在反相色譜中晚出峰，我們也能通過調整流動相的極性，來改變組分的出峰時間，讓分離效果更好。

反相色譜分離邏輯

下面再和大家分享一些液相色譜儀的常見知識，方便日常使用參考：

超高速分析

現在不少液相色譜儀的耐壓水平能達到 140MPa，這可不是隨便的參數 —— 有了這個能力，才能真正實現超高速分離。以前耐壓低的時候，流動相流速不能太快，不然壓力會超標，分離時間就得拉長；現在耐壓上去了，流速可以適當提高，原本要 1 小時的分析，可能 20 分鐘就能完成，大大節(jié)省了時間。而且因為系統(tǒng)耐壓能力變強了，就算是一些可能讓壓力升高的流動相（比如含鹽量稍高的水相），也能放心使用，這樣一來，我們能選擇的分析方法就更多了，尤其在檢測成分復雜的樣品（比如食品里的多種添加劑、環(huán)境水樣里的微量污染物），或是開發(fā)新的分析方法時，能幫上不少忙。

高分辨分析

要實現高分辨分析，離不開儀器各部分的優(yōu)化：a. 新開發(fā)的色譜柱，理論塔板數能達到 50000 以上，耐壓也能到 140MPa，有了這樣的柱子，才能真正做到高分辨分析。“理論塔板數” 是衡量柱子分離能力的關鍵指標，數值越高，分離效果越好，就算是兩種性質很接近的組分（比如結構相似的同分異構體），也能清晰分開；b. 新型的二元泵，配備了沖程可變的獨立柱塞，除了用了日立特有的 LBT*1 技術，還自帶低容量雙螺紋混合器，這兩個設計加起來，能明顯提升送液的混合效果，讓流動相的比例更精準、輸送更穩(wěn)定。流動相混合不均勻的話，會導致基線漂移，影響檢測結果，穩(wěn)定的送液能讓譜圖更平穩(wěn)，數據更可靠；c. 儀器用的是 10mm 全反射型毛細管流通池，這種流通池能有效減少柱外擴散的影響。“柱外擴散” 就是組分在離開色譜柱后，還沒到檢測器就提前擴散開，導致峰變寬、分離度下降，而這種流通池能大限度避免這個問題，這樣后得到的分離分辨率自然就更高了。

高靈敏度分析

對于需要檢測微量物質的場景（比如藥品里的微量雜質、血液里的痕量激素），高靈敏度就很關鍵了：a. 二極管陣列檢測器搭配了 65mm 流通池，靈敏度特別高，面對痕量物質檢測時，表現很出色。流通池的長度會影響檢測靈敏度，65mm 的長度能讓組分在檢測器里停留更久，信號更強，就算是含量極低的組分，也能被準確捕捉到；b. 它的新型光學系統(tǒng)做了優(yōu)化，能有效降低噪聲和信號漂移，這樣就算是高靈敏度分析，結果也能保持可靠。噪聲大會讓基線波動，容易誤判 “有沒有組分”，信號漂移則會影響峰面積的準確性，優(yōu)化后的光學系統(tǒng)能讓檢測更穩(wěn)定，數據誤差更?。籧. 自動進樣器提供了好幾種清洗模式，而且還標配了進樣口反沖功能，能大大降低樣品殘留的風險，避免影響下一次檢測。如果進樣器有殘留，上一個樣品的組分可能會混入下一個樣品的檢測中，導致 “假陽性” 結果，多模式清洗和反沖功能，能把殘留控制在極低的水平，保證每次檢測的獨立性。

使用注意事項

后再提醒大家?guī)讉€使用時的注意點，能更好地保護儀器、保證檢測效果：

流動相一定要用色譜純級別的，要是用到水相，建議選 20MΩ 以上的去離子水。普通試劑里的雜質會污染色譜柱和檢測器，還會在譜圖上出現雜峰，干擾分析；20MΩ 以上的去離子水能避免水中的離子堵塞柱子或影響檢測信號，比如水中的鈣、鎂離子可能會和流動相里的成分反應，產生沉淀；

流動相脫氣后，別劇烈晃動，不然容易產生氣泡，影響后續(xù)操作。氣泡進入管路后，會導致壓力不穩(wěn)定，還可能在檢測器里產生 “假峰”，甚至損壞高壓泵，所以脫氣后要輕輕轉移、平穩(wěn)放置；

色譜柱比較脆弱，大家初次建立分析方法時，建議先不接色譜柱，先把實驗條件摸索好，再連接柱子正式檢測。新方法的流動相比例、流速可能不合適，直接接柱子容易讓柱子承受過大壓力，或被雜質污染，先 “空載” 摸索條件，能減少對柱子的損傷；

所有要流過色譜柱的液體，都必須經過嚴格過濾（通常用 0.22μm 或 0.45μm 的濾膜），防止雜質堵塞柱子。色譜柱里的填料顆粒很細，一旦有固體雜質進去，就會卡在填料間隙里，導致柱壓升高、分離效果下降，嚴重時柱子會直接報廢；

系統(tǒng)壓力別調得太高，建議控制在 2000psi（大概 13.79 MPa）以內，這樣能更好地保護色譜柱和整個儀器系統(tǒng)，延長使用壽命。壓力過高會讓色譜柱的填料顆粒受壓變形，還會損壞高壓泵的密封件，增加儀器故障的概率，日常使用中要多觀察壓力變化，發(fā)現壓力異常及時停機檢查。 文章內容不變，結構化明顯，方便客戶閱讀

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