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目錄

第 1 章 前言 1

1.1 HPLC 法測定維生素含量的標(biāo)準(zhǔn) 1

1.2 儀器配置簡表 2

第 2 章 維生素 A 的含量測定 3

2.1 反相高效液相色譜法 3

2.2 正相高效液相色譜法 10

2.3 紫外分光光度計法 11

第 3 章 維生素 D 的含量測定 13

3.1 反相高效液相色譜法 13

3.2 正相高效液相色譜法 19

第 4 章 維生素 E 的含量測定 21

4.1 反相高效液相色譜法 21

4.2 正相高效液相色譜法 26

第 5 章 維生素 B1 的測定 29

5.1 儀器設(shè)備與試劑 29

5.2 實驗方法 30

5.3 實驗結(jié)果 31

第 6 章 維生素 B2 的測定 34

6.1 儀器設(shè)備與試劑 34

6.2 實驗方法 35

6.3 實驗結(jié)果 36

第 7 章 維生素 B3 (煙酸) 的測定 39

7.1 儀器設(shè)備與試劑 39

7.2 實驗方法 40

7.3 實驗結(jié)果 41

第 8 章 泛酸的測定 44

8.1 儀器設(shè)備與試劑 44

8.2 實驗方法 45

8.3 實驗結(jié)果 46

第 9 章 維生素 B6 測定 49

9.1 儀器設(shè)備與試劑 49

9.2 實驗方法 50

9.3 實驗結(jié)果 51

第 10 章 維生素 K1 的測定 54

10.1 儀器設(shè)備與試劑 54

10.2 實驗方法 55

第 11 章 葉酸的測定 56

11.1 儀器設(shè)備與試劑 56

11.2 實驗方法 56

第 12 章 維生素 B12 的測定 57

12.1 儀器設(shè)備與試劑 57

12.2 實驗方法 57

附錄 1 維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液校正方法 59

第 1 章 前言

維生素（英語：Vitamin）是一系列有機化合物的統(tǒng)稱。它們是生物體所需要的微量營養(yǎng)成分，而一般又無法由生物體自己生產(chǎn)，需要通過飲食等手段獲得。維生素不能像糖類、蛋白質(zhì)及脂肪那樣可以產(chǎn)生能量、組成細(xì)胞，但是它們對生物體的新陳代謝起調(diào)節(jié)作用。

維生素是食品中重要的營養(yǎng)成分，缺乏維生素會導(dǎo)致嚴(yán)重的健康問題，適量攝取維生素可以保持身體健康，過量攝取維生素卻會導(dǎo)致中毒；因此食品中維生素含量的檢測至關(guān)重要。國家頒布多項標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)，對食品、保健品、食品添加劑等中維生素含量檢測進(jìn)行規(guī)范，以保障食品安全。依利特儀器參考國家標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)，整理了食品中維生素檢測解決方案，供相關(guān)企業(yè)參考使用。

1.1 HPLC 法測定維生素含量的標(biāo)準(zhǔn)

第 2 章 維生素 A 的含量測定

2.1 反相高效液相色譜法

本節(jié)反相高效液相色譜法對維生素 A 進(jìn)行檢測是參考 GB 5009.82-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素 A、D、E 的測定》，適用于需要參照 GB 5009.82-2016 對食品中維生素 A 進(jìn)行檢測的用戶參考使用。

2.1.1 儀器設(shè)備與試劑

實驗過程中其它玻璃器皿還包括棕色容量瓶 (10mL、50mL)、1.5mL 塑料離心管、移液槍 (0~1000μL，0~5000μL)、移液槍槍頭 (1mL，5mL)、一次性注射器 (1mL)、針筒式濾膜 (0.45μm)、進(jìn)樣針、一次性 PVC 手套、一次性口罩等。

2.1.2 實驗方法

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

維生素 A 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液 (0.500mg/mL)：準(zhǔn)確稱取 25.0mg 維生素 A 標(biāo)準(zhǔn)品，用無水乙醇溶解后，轉(zhuǎn)移入 50mL 容量瓶中，定容至刻度，此溶液濃度約為 0.500mg/mL。將溶液轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶中，密封后，在 - 20℃下避光保存，有效期 1 個月。臨用前將溶液回溫至 20℃，并進(jìn)行濃度校正。

維生素 A 標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液：準(zhǔn)確吸取維生素 A 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液 1.00mL 和維生素 E 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液各 5.00mL 于同一 50mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此溶液中維生素 A 濃度為 10.0μg/mL，維生素 E 各生育酚濃度為 100μg/mL。在 - 20℃下避光保存，有效期半個月。

維生素 A 標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取維生素 A 標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液 0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL 于 10mL 棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，該標(biāo)準(zhǔn)系列中維生素 A 濃度為 0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、4.00μg/mL、6.00μg/mL，臨用前配制。

樣品前處理

試樣制備：將一定數(shù)量的樣品按要求經(jīng)過縮分、粉碎均質(zhì)后，儲存于樣品瓶中，避光冷藏，盡快測定。

注意：樣品前處理使用的所有器皿不得含有氧化性物質(zhì)；分液漏斗活塞玻璃表面不得涂油；處理過程應(yīng)避免紫外光照，盡可能避光操作；提取過程應(yīng)在通風(fēng)柜中操作。

皂化

不含淀粉樣品：稱取 2g~5g（精確至 0.01g）經(jīng)均質(zhì)處理的固體試樣或 50g（精確至 0.01g）液體試樣于 150mL 平底燒瓶中，固體試樣需加入約 20mL 溫水，混勻，再加入 1.0g 抗壞血酸和 0.1g BHT，混勻，加入 30mL 無水乙醇，加入 10mL~20mL 氫氧化鉀溶液，邊加邊振搖，混勻后于 80℃恒溫水浴震蕩皂化 30min，皂化后立即用冷水冷卻至室溫。

注：皂化時間一般 30min，如皂化液冷卻后液面有浮油，需要加入適量氫氧化鉀溶液，并適當(dāng)延長皂化時間。

含淀粉樣品：稱取 2g~5g（精確至 0.01g）經(jīng)均質(zhì)處理的固體試樣或 50g（精確至 0.01g）液體樣品于 150mL 平底燒瓶中，固體試樣需用約 20mL 溫水混勻，加入 0.5g~1g 淀粉酶，放入 60℃水浴避光恒溫振蕩 30min 后，取出，向酶解液中加入 1.0g 抗壞血酸和 0.1g BHT，混勻，加入 30mL 無水乙醇，10mL~20mL 氫氧化鉀溶液，邊加邊振搖，混勻后于 80℃恒溫水浴振蕩皂化 30min，皂化后立即用冷水冷卻至室溫。

提?。簩⒃砘河?30mL 水轉(zhuǎn)入 250mL 的分液漏斗中，加入 50mL 石油醚 - 乙醚混合液，振蕩萃取 5min，將下層溶液轉(zhuǎn)移至另一個 250mL 的分液漏斗中，加入 50mL 的混合醚液再次萃取，合并醚層。

注：如只測維生素 A 與 α- 生育酚，可用石油醚作提取劑。

洗滌：用約 100mL 水洗滌醚層，約需重復(fù) 3 次，直至將醚層洗至中性（可用 pH 試紙檢測下層溶液 pH 值），去除下層水相。

濃縮：將洗滌后的醚層經(jīng)無水硫酸鈉（約 3g）濾入 250mL 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶或氮氣濃縮管中，用約 15mL 石油醚沖洗分液漏斗及無水硫酸鈉 2 次，并入蒸發(fā)瓶內(nèi)，并將其接在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或氣體濃縮儀上，于 40℃水浴中減壓蒸餾或氣流濃縮，待瓶中醚液剩下約 2mL 時，取下蒸發(fā)瓶，立即用氮氣吹至近干。用甲醇分次將蒸發(fā)瓶中殘留物溶解并轉(zhuǎn)移至 10mL 容量瓶中，定容至刻度。溶液過 0.45μm 有機系濾膜后供高效液相色譜測定。

2.1.3 色譜條件

流動相：甲醇/水

色譜柱：Supersil ODS2 5μm 4.6×250mm

或 Supersil PFP 5μm 4.6×250mm

或 Supersil C30 3μm 4.6×250mm

流量：1.0mL/min

檢測：UV325nm

或激發(fā) 328nm，發(fā)射 440nm

進(jìn)樣體積：10μL

2.1.4 實驗結(jié)果

Supersil PFP 5μm 4.6×250mm 色譜柱分析結(jié)果

根據(jù)濃度和峰面積數(shù)據(jù)，得到維生素 A 的線性曲線方程為：y=42.544x - 1.4395，R^{2}=1.000。因此維生素 A 在 0.2~10μg/mL 濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

重復(fù)性：用濃度為 10μg/mL 維生素 A 標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣 6 針，峰面積和保留時間 RSD 結(jié)果如下：

該色譜條件下，儀器的基線噪音為 0.0302mAU，根據(jù)信噪比S/N=3，計算得到維生素 A 的儀器小檢測濃度為 0.017μg/mL，實際方法檢出限為 3.5μg/100g，比國標(biāo)的方法檢出限 10μg/100g，靈敏度高了不少。實際樣品分析AD 鈣奶樣品中維生素 A 的含量分析

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后續(xù)章節(jié)詳情：第 2 章剩余內(nèi)容（正相高效液相色譜法、紫外分光光度計法）及第 3 章至第 12 章（維生素 D、E、B 族、K1、葉酸、B12 等 11 類維生素的完整檢測方法、實驗結(jié)果及結(jié)論）；

高清資料：所有章節(jié)譜圖（圖 2-1 至圖 12-1）高清版（含峰形放大細(xì)節(jié)、基線噪聲標(biāo)注）、實際食品樣品（乳制品、保健品、谷物）檢測原始譜圖；

驗證數(shù)據(jù)：各維生素線性方程、檢出限 / 定量限報告、不同基質(zhì)加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)（85%-103%）、精密度驗證結(jié)果（RSD＜2%）；

操作指南：皂化 / 酶解操作視頻、固相萃取實操教程、色譜柱活化與維護(hù)細(xì)則；

附錄文件：GB 5009 系列、GB 14750 等標(biāo)準(zhǔn)原文節(jié)選、維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液校正詳細(xì)步驟、耗材訂貨清單（色譜柱、試劑、濾膜型號編碼）。

下載通道

直接下載：www.bbc65.com/ 食品維生素檢測方案

技術(shù)咨詢：400-66-35483